Laboratóriumi diagnosztikai módszerek

Rádióallergikus teszt (RAST). Az utóbbi években olyan eljárást dolgoztak ki, amely az allergiás betegségekben szenvedő betegek szérumában különböző osztályok specifikus antitestjeit azonosítja. 1967-ben Wide, Bcnnich és Johanssen találtak egy módszert a nem fertőző allergének elleni specifikus IgE antitestek kimutatására. Kiderült, hogy a szérum IgE-koncentráció a pollinosisban és az asztmában szenvedő betegeknél magasabb, mint a kontrollcsoportban. Ez az alapja annak a feltételezésnek, hogy ez az immunglobulin közel áll az ellenanyag-reagensekhez, és nagyon érzékeny PAST-t javasoltak azok azonosítására (antitestek).

Ezzel a módszerrel kvantitatív meghatározást kapunk a vérben lévő allergiás specifikus IgE-re. A módszer alapelve, hogy a tesztallergén kovalensen csatlakozik a papírlemezhez. A beteg szérumának hozzáadásával az allergén kötődik az antitesthez, ha a szérum az allergénnek megfelelő IgE-t tartalmaz. A nem specifikus IgE mosása után radioaktív jóddal jelölt IgE elleni antitesteket adunk hozzá. A komplex kialakulása: allergén a papírspecifikus IgE + IgE antitesteken. A nem kötött IgE antitesteket eltávolítjuk. Ennek a komplexnek a radioaktivitása könnyen meghatározható. Minél nagyobb a radioaktivitás, annál specifikusabb az IgE a beteg szérumában. A kísérleti minta radioaktivitását összevetjük a referencia szérumok indikációival, és ezen az alapon értékelik a kapott eredményeket. A módszer értéke abban rejlik, hogy az egyetlen allergén vizsgálatához csak 0,05 ml-re van szükség a páciens szérumára, ami lehetővé teszi, hogy a tesztet több allergénnel egyidejűleg lehessen elhelyezni.

A RAST lehetővé teszi a specifikus immunglobulinok meghatározását nemcsak a szérumban, hanem a nyálban, a gyomor tartalmában, a székletben stb. Különösen értékes. Egyes kutatók szerint a titkokban lévő specifikus immunglobulinok meghatározása informatívabb, mint a vérszérumban.

Jelenleg a modern laboratóriumi diagnosztika RAST bevezetése ellenére a vérsejtek reakcióin alapuló egyszerűbb módszerek nem vesztették jelentőségüket.

Az allergia elméletének általános problémáira és az allergiás folyamat patogenezisére vonatkozó irodalomban nagy figyelmet fordítanak a vér sejtelemei szerepére az allergiás reakciók megvalósításában.

A vérsejtek lehetnek antitestek hordozói (limfociták), rögzíthetik magukra antigén-antitest komplexet (vérlemezkék, eritrociták, granulált leukociták, bazofilek). A laboratóriumi diagnosztika néhány módszere a vérsejtek ezen tulajdonságain alapul.

A bazofil leukociták degranulációjának vizsgálata. Számos tanulmány meggyőzően bizonyította, hogy az allergiás reakciókban részt vevő vér-bazofilek és szöveti hízósejtek, főleg azonnali (kiméra) típusúak, átalakulnak, degranulálódnak, sőt lízissé válnak, amit a biológiailag aktív anyagok felszabadulása kísér. 1962-ben egy diagnosztikai tesztet javasoltak, amely a bazofil formájának antigén-antitest-komplex jelenlétében történő változása alapján történt. Azóta ezt a reakciót „Shelley-tesztnek” nevezték, a szerző nevét követően.

Két reakcióváltozat van: közvetlen és közvetett. Közvetlen reakció áll fenn a beteg allergiás basophil leukocitáira. Ez a módszer azonban nagy mennyiségű beteg vérét igényli, mivel ismert, hogy az egyén vérében a basophilok száma kicsi (0,3–0,4%), ezért a leokokoncentrációt előzetesen végzik. Gyermekgyakorlatban az élelmiszerallergiák diagnózisát Shelley közvetett vizsgálatával végzik.

Allergén tesztek

Olyan környezetben élünk, amely szó szerint tele van sokféle allergénnel, és nehéz elkülöníteni azt, amely patológiás reakciót okoz. Az allergiás reakciók kialakulásában részt vevő anyagok allergiás vizsgálata és laboratóriumi vizsgálata a vérben megmentésre kerül.

Az allergiás vizsgálatok az immunválasz utánzására tett kísérletet jelentik a kívánt allergén minimális dózisainak beadásával. A mintákat remisszió (javulás) és akut allergiás reakciót követő 2-3 hét múlva végezzük. Minden allergiás diagnosztikai vizsgálat két csoportra oszlik: bőr és provokatív.

Bőrvizsgálatok

A bőr nagy számú hízósejtet tartalmaz, amelyek gyorsan reagálnak az allergén bevezetésére gyulladásos mediátorok felszabadításával - biológiailag aktív anyagokkal, amelyek helyi gyulladásos reakciót okoznak, amelyet vizuálisan könnyen meg lehet vizsgálni.

A végrehajtás technikája szerint a következő típusú bőrallergiás teszteket különböztetjük meg:

  • Alkalmazás: olyan bőrön, amely nem vesz részt allergiás károsodásban, egy allergiás oldatba mártott gézzel töltsön be, és ragasztószalaggal rögzítse. Az eredményt 20 perc múlva értékeljük (azonnali típusú reakciót észlelünk), majd 5-6 óra múlva (ezen időszak maximális megnyilvánulása az immunkomplex típusú allergiás reakcióra jellemző) és 1-2 nap után (késleltetett reakció).
  • Scarification: az alkar területen a bőrön különböző allergének cseppjei kerülnek, majd a cseppen keresztül egy aprítóval kissé megkarcolják a bőr felszínrétegét, és nem károsítják a véredényeket. Ez a vizsgálat csak anafilaxiás reakciókat tár fel (I. típus). A vizsgálat eredményét 12-18 perc alatt értékeljük. A scarification teszt egyik változata széles körben elterjedt prick teszt: a bőr felső rétegének tűvel történő átfúrása egy csepp allergén.
  • Intradermális: egy allergént intradermális injekció formájában adnak be. Ezek a minták érzékenyebbek, de általános allergiás reakciókat okozhatnak. Leggyakrabban a fertőző ágensek (baktériumok, gombák) allergiájának meghatározásakor használják. Az intradermális vizsgálatok késleltetett allergiás reakciót mutatnak.
További információ a bőrvizsgálatokról.

Reakció Prausnitsa-Kyustner

Ez a vizsgálat némileg eltér a bőrvizsgálatok sorozatában, mivel ez közvetett reakció. Egy allergént nem injektálnak be a páciensbe, és a beteg szérumát intracután injekciózzák egy egészséges személybe, majd az allergént az injekció helyére alkalmazzák. A reakció megjelenése jelzi az antitestek jelenlétét a szérumban a vizsgált antigénhez. A modern gyakorlatban ezt a mintát leggyakrabban visszautasítják, mert bizonyos fertőzések kórokozóinak átadása lehetséges.

Provokatív tesztek

Ha a bőrvizsgálatok eredményei nem egyeznek meg az anamnézis adataival, provokatív teszteket alkalmaznak, amelyek az allergiás reakciót közvetlenül az allergia célszervében reprodukálják. A következő típusú provokatív minták vannak:

  • Konjunktiváció: a feltételezett antigén oldatának a szembe való beillesztése;
  • Nazális: az orrüreg nyálkahártyájára allergént alkalmazunk;
  • Belégzés: egy allergén belélegzésére adott reakció vizsgálata;
  • Hideg és termikus: a magas és alacsony hőmérsékleti hatásokra adott reakció vizsgálata;
  • Expozíció: a beteg érintkezésének modellezése az allergénnel a természeti környezetben;
  • Elimináció: az előzővel ellentétben kizárjuk a páciens érintkezését a tervezett allergénnel;
  • Leukocitopeniás és thrombocytopeniás vizsgálatok: a vérben levő leukociták és vérlemezkék számának vizsgálata az allergén bevezetése után. Allergia jelenlétében csökken a számuk.

Az allergiák diagnózisának vizsgálatán túlmenően széles körben használják az E és G osztályú immunglobulinok tartalmára vonatkozó vérvizsgálatot.

Allergén vérvizsgálatok

IgE - ezek olyan antitestek, amelyek közvetlenül befolyásolják az allergiák kialakulását. Az IgE mennyisége a normában általában kicsi, de az allergiás reakciókra hajlamos személyben nő. Az allergiák azonosításához azonban fontos, hogy ne csak az IgE általános szintjét ismerjük, hanem a specifikus immunglobulinok számát is, amelyek egy vagy másik allergén ellenanyagok. Ehhez hajtsa végre a következő teszteket:

PACT (rádió allergiás teszt)

Ez a vizsgálat lehetővé teszi az E osztályba tartozó specifikus immunglobulinok azonosítását bizonyos allergének esetében. A beteg vénás vérének egy kis részében radioaktív jelzést adnak, amely az IgE-hez kötődik. Ezután egy csepp vér kerül az allergén oldatba áztatott papírlemezre. Ha a vér specifikus antitesteket tartalmaz, akkor egy antitesthez kötődik egy antigén. Ezután radioaktív izotópot adunk ehhez a mintához, amely az antigén + antitest komplexhez kötődik. Egy speciális készülék segítségével meghatározhatja az ilyen kötött IgE mennyiségét.

Ez a módszer nagyon érzékeny, képes rögzíteni a legalacsonyabb IgE koncentrációt a beteg vérében. Ugyanakkor meglehetősen drága. Ezért a PACT-ot bőrvizsgálatokkal együtt alkalmazzák, ha az utóbbi eredményei bizonytalanok. Vagy olyan esetekben, amikor a bőrvizsgálat ellenjavallt (5 év alatti gyermekek, súlyos akut allergiás folyamatban szenvedő betegek).

MAST (többszörös allergia teszt)

Az lgE-kötéshez radioaktív címkét nem használnak, hanem egy olyan enzimet, amely egy antitesttel reagál és lumineszcenciát okoz - egy ragyogás, amelyet egy speciális filmre felvétel készíthet. Az egyik ilyen vizsgálat lehetővé teszi több mint 30 antigén azonosítását.

A perifériás vérben az IgG szintjének meghatározása fontos diagnosztikai értékkel bírhat az allergiák azonosításában. Végül is, az allergiás reakciók II (citotoxikus) és a III. Típusú (immunkomplex) az ezen osztályba tartozó immunglobulinok fokozott termelésével jelentkeznek.

Sok allergiás reakció kialakulásában kulcsszerepet játszik az IgG, amely az IgE-hez hasonlóan bazofil degranulációt okozhat, és aktiválja a komplement rendszert. Az IgG-közvetített allergiás reakciók olyan esetekben fordulnak elő, amikor az allergén (általában az élelmiszer) hosszú ideig lenyelt.

Az IgE által közvetített allergiás típusú allergiás betegek általában jól ismerik az allergiás reakciót okozó termékeket, mivel a reakciót azonnal észlelik az allergén bevétele után. Az IgG-típusú allergiás betegek nem tudják önállóan meghatározni azokat a táplálékokat, amelyeket ki kell zárni az étrendből. Évek óta próbálják megbirkózni a krónikus betegségekkel, nem tudva, hogy a probléma abban rejlik, hogy naponta fogyasztanak allergén terméket.

A speciális laboratóriumi vizsgálatok meghatározhatják az élelmiszer-allergének több tucatnyi specifikus antitestjét. A specifikus IgG kimutatásának növekedésétől függően a betegnek ajánlott, hogy kizárja az étrendből azt a terméket, amely ezeknek az antitesteknek a termelését okozza.

A specifikus G- és E-immunglobulinok mintáinak kombinációja megbízhatóbb és pontosabban azonosítja az élelmiszer-allergia típusát. IgG-közvetített reakció esetén az IgE szintje normális vagy enyhén csökken, és a specifikus IgG mennyisége drámai módon nő. Ez a tulajdonság a késleltetett típusú allergiás reakciókra jellemző.

A specifikus IgG vizsgálati eredményeinek értelmezésekor figyelembe kell venni azt a tényt, hogy az ezen osztályba tartozó antitestek képesek blokkolni az antitesteket, enyhítve az IgE által közvetített allergiás reakciók megnyilvánulásait, valamint hogy az IgG szintek veleszületettek lehetnek. Ezért az allergiák pontos diagnózisához szükség van a történelem, a minták és a laboratóriumi paraméterek átfogó értékelésére.

Hasznos volt az oldal? Ossza meg a kedvenc szociális hálózatában!

Az allergiás diagnózis laboratóriumi módszerei

Ezek a módszerek széles körben alkalmazhatók allergiás betegségek esetén az akut fázisban, az allergénnel való súlyos érintkezés időszakában, a betegek nagyfokú érzékenységével az allergénre, ha gyermekeknél ellenjavallatok vannak a foglalkozási allergiás betegségek azonosításában, mivel kizárják a nem specifikus, hamis allergiás reakciók lehetőségét.

Azonnali, B-függő típusú allergiás reakciót észlelő módszerek a következők:

a) a teljes IgE meghatározása (azonban magas szintje az immunválasz produktív fázisában lehet), t

b) az allergén-specifikus IgE és IgG4 meghatározása.

Az IgE és az IgG4 szintjét ELISA-val határozzuk meg (lásd a 6. szakaszt).

Az IgE és az IgG4 kimutatása több mint 400 allergén ellen történik, beleértve az élelmiszer-allergéneket is; baktériumok és gombák allergénjei, állati haja és borotva, madár toll; fű és fa pollenallergének; atkák allergének, ház- és könyvtárpor, rovarok; gyógyászati ​​és foglalkozási allergének.

Jelenleg olyan tesztrendszereket fejlesztettek ki, amelyek lehetővé teszik a specifikus IgE többszörös diagnosztikáját. A kemilumineszcens analízist (MAST-CLA, MAST allergotest) használó többszörös allergiás vizsgálat lehetővé teszi, hogy egyidejűleg akár 36 allergént is meghatározzon kis mennyiségű szérummal (0,75 ml). A vizsgálathoz a MAAST-allergopanelt használják, amely egy üreges, átlátszó műanyag tok, amelynek a legvékonyabb cellulózszálai párhuzamosak a belsővel, amelyre allergéneket sorolnak be (9.1. Ábra).

Megjegyzés: 1 - MAST panelszerelvény, 2 - fedél,

3 - cellulózfonal adszorbeált allergénnel, 4 test

Ábra. 9.1 A kemilumineszcens elemzés elve a MAST során

A MAST allergotest lényege, hogy az allergén kötődését specifikus IgE-vel végezzük, majd a kapott komplexet fotoreagenssel jelöljük, és meghatározzuk annak lumineszcenciáját, amelynek intenzitása arányos a specifikus IgE koncentrációjával a beteg szérumában. A MAST allergopanelt (hagyományos fecskendővel) betöltjük a beteg szérumával, szobahőmérsékleten 16-24 órán át inkubáljuk. Ezután a panel szokásos desztillált vízzel pufferrel való mosása után egy konjugátummal (anti-IgG, peroxidázzal jelölt) töltjük, és 4 órán át inkubáljuk. Ezután a mosást követően a panelt fotoreagenssel töltjük és luminométerekben elemezzük. A készülék 0 és 4 közötti értékosztályt regisztrál a panel minden egyes filamentumából származó lumineszcencia szintnek megfelelően. Ezek az osztályok megfelelnek a bőrvizsgálatok osztályainak. A MAST allergiás osztályoknak és luminométer értékeknek megfelelő IgE szinteket a 9.2.

Az eredmények értelmezése többszörös allergiás vizsgálat során

A specifikus IgE kimutatása mellett más laboratóriumi vizsgálatokat alkalmaznak mind az antitesttől függő, mind a késleltetett típusú reakciók diagnosztizálására. Ezek a módszerek lehetővé teszik az allergiás reakciók patogenezisének vizsgálatát. Ezek a következők:

- hízósejt vagy bazofil degranulációs reakció, t

- a vérleukociták (RTML) migrációjának gátlása, t

- neutrofil károsodási reakció (RPN), t

- a szabad kötött hisztamin meghatározása, t

- IL 4,5,6, TGFb meghatározása,

- a triptáz és a kimotriptáz meghatározása (triptáz, különösen a β-forma, az anafilaxiás reakció után 4 órával kimutatható a vérben, és az anafilaxiás klinikai markerként szolgál), t

- leukotriének (LTC4, LTD4, LTE4) meghatározása sejt-mediátor felszabadulási teszt alkalmazásával, t

- a felületen a CD63 antigént (gp53) expresszáló aktivált bazofilok számának meghatározása az allergén stimuláció hatására (citometriás allergén stimuláló sejt teszt, CASC teszt).

Ezeknek a mutatóknak a meghatározása lehetővé teszi, hogy megértsük az allergiás reakciók lefolyásának egyedi jellemzőit, amelyek fontosak a beteg kezelésében.

A mediátorok felszabadulására szolgáló sejtvizsgálat alapja a szteridol-leukotriének (LTC4, LTD4, LTE4) meghatározása, amelyeket a basophilok egy allergén hatására in vitro szekretálnak (9.2. Ábra). In vitro provokatív tesztnek is nevezik. A szulfidol-leukotriének de novo szintézise miatt ez a teszt nagyobb a specificitással, mint a klasszikus hisztamin felszabadulási vizsgálat. A vizsgálati protokoll három lépésből áll:

1) a limfocita populáció izolálása stabilizált vér EDTA-ból, t

2) a limfocita szuszpenzió stimulálása specifikus allergénekkel, t

3) a bazofilek által stimuláció során szintetizált leukotriének enzimhez kötött immunoszorbens vizsgálata.

9.2. Ábra A bazofil antigén stimulációs tesztek elve

A vizsgálatot a leukotriének 200 pg / ml szintjének meghatározásakor az élelmiszer, az inhalációs allergének, a latex, a rovar mérgek pozitívnak tekintik; a kábítószer-allergének, valamint az élelmiszer- és kémiai adalékanyagok 40 pg / ml.

A bazofil stimulációs teszt citometriai változata, a sejtes tesztet stimuláló citometriai antigén (CASC teszt) lehetővé teszi a CD63 antigént a felületen expresszáló aktivált bazofilek számának meghatározását. A limfociták izolálásának szakaszai és antigének stimulálása mindkét variáns esetében (enzim immunoassay és citometriai) azonosak. A szulfidol-leukotriének helyett a harmadik lépés meghatározza a CD63 antigént (gp53) a felületen expresszáló aktivált bazofilok számát az allergénnel történő stimuláció hatására. A vizsgálat rendkívül érzékeny és specifikus anafilaxiás reakciókban, különösen a gyógyszer túlérzékenységében.

A CASK-tesztben az izolált leukocitákat stimuláló pufferrel és allergénnel inkubáljuk. Ezután hozzáadjuk az anti-IgE monoklonális Ab-t fluoreszcens jelöléssel, hogy azonosítsuk a bazofileket, majd monoklonális Ab-ot adunk a CD63-hoz (lásd 9.2. Ábra), és a CD63 AH expressziót a bazofil felületén áramlási citometriával határozzuk meg. Például az élelmiszer- és inhalációs allergének esetében a teszt pozitívnak tekinthető, ha a CD63-at 15% bazofil felületén expresszálják; rovar mérgek esetében - 10%; béta-laktám antibiotikumok és fájdalomcsillapítók - 5% bazofil és stimulációs index 2. Számítsuk ki a stimulációs indexet, amely a mintában levő CD63 + basofilek aránya az allergénnel (%) és a mintában lévő allergénszámmal (%).

Caska teszt specifikus meghatározására IgE-közvetített allergia inhalációs allergének (ha bőrpróba nem hajtható végre, mert fennáll a veszélye a hörgőgörcs és állapot asztmaticus), pollen, gyógyszerek, béta-laktám antibiotikumok, izomlazítók, fájdalomcsillapítók, allergia latex, csípések Hymenoptera rovarok, pszeudo-allergiás reakciók a komplement komponensek által indukált gyulladáscsökkentő nem-szteroid hatóanyagokra, plazma, IgE autoantitestek meghatározása. A CASK teszt eredményei jól illeszkednek a bőrvizsgálatok eredményeihez.

Mindkét teszt nagyon specifikus az élelmiszerallergiák és intolerancia diagnosztizálására, amikor a bőrvizsgálatok nem használhatók (latex allergiák, hymenoptera rovarcsípések, allergiák a gyermekeknél, kábítószer-allergia és intolerancia, különböző pszeudo-allergiás reakciók).

A hiperkallergén és az eliminációs étrend összeállításához a CASK teszt és a mediátorok felszabadulásának tesztelése a táplálékallergiák és az intolerancia diagnózisában használható.

Pszeudo-allergiás reakciók diagnózisa. A klinikai tünetek esetén a pszeudo-allergiás reakciók hasonlóak lehetnek az igazi IgE által közvetített reakciókhoz, de fejlődési mechanizmusukban különböznek. Fejlődésük nem kapcsolódik az Ab termeléséhez vagy a szenzitizált limfociták részvételéhez, ezeknek a reakcióknak a patogenezisében csak két szakasz van - patokémiai és patofiziológiai. E tekintetben ezekben a betegekben a szérum IgE koncentrációja általában a normál tartományon belül van.

Azonban pszeudo-allergiás reakciók esetén a mediátorok nem specifikus felszabadulása következik be: hisztamin, leukotriének, prosztaglandinok. Ezért a pszeudo-allergiás reakciók diagnosztizálásához a CASA-tesztet az aktivált basophilok és a mediátorok felszabadulásának sejtes tesztjeinek kimutatására használják az LTC4, LTD4 és LTE koncentrációjának megállapításához.

MACT (többszörös allergia teszt)

Az elemzés értelmezése

n Ennek eredményeként a becslések szerint milyen osztályba tartozik az allergén. A 3. és 4. osztály azonosítása és a klinikai kép releváns adatai alapján ezt az allergént ok-szignifikánsnak mondhatjuk.

n Ha az 1. és 2. osztályt azonosítja, a klinikai kép adataival, a betegség időtartamával kell összehasonlítani, figyelembe véve a lehetséges keresztreaktivitás jelenlétét.

n A szérum IgE meghatározásának eredményeinek és a bőrvizsgálatok eredményeinek összehasonlításakor figyelembe kell venni, hogy a szérum IgE felezési ideje 2-3 nap, a bőrben lévő hízósejtek pedig több hónapig tarthatnak.

n A MAST és a bőrvizsgálatok során a pozitív eredmények egybeesését a reakció intenzitása és az allergének listája követi.

3.2.4 Kemilumineszcens (MAST CLA).

n Allergiás szűrő IgE: s IgE kvantitatív meghatározása 36 allergénre

Aspergillus gomba, Kladosporium gomba, fekete éger, fehér nyír, mogyoró pollen, csokor, sündisznó, rozs, timothy, quinoa - keverék, pitypang, üröm - keverék, toll - keverék, ló, kutya, macska, csótány - keverék, ház por - D.Pterony kullancs, D.Farinae kullancs, alma, marhahús, sárgarépa, gabonafélék - keverék (kukorica, zab, rizs), csirke, tőkehal, egész tojás, mogyoró, tehéntej, borsó, sertéshús, burgonya, szója, eper, paradicsom, búza).

n Élelmiszer panel IgE: 36 élelmiszerallergén mennyiségének meghatározása (teljes IgE, mandula, banán, fehér bab, marhahús, sárgarépa, káposzta, keverék (fehér, brokkoli, szín), zeller, csirke, csokoládé, tőkehal, kukorica, tojás (fehérje), tojás (tojás) tojássárgája), fokhagyma, tej, ehető gombák, hagyma - keverék (fehér, sárga), narancs, borsó, mogyoró, sertés, burgonya, mazsola, rizs, rozs, tenger gyümölcsei - keverék (kagyló, rák, garnélarák), szója, tök keverék, cukor keverék, paradicsom, tonhal, pulyka, dió, búza, élesztő).

n Allergiás szűrő IgE (20): s IgE kvantitatív meghatározása 20 allergénre (fehér nyír, parlagfű (keverék), timothy, féregfa, latex, szójabab, rizs, tőkehal, búza, földimogyoró, tojásfehérje, tej, Aspergillus gomba, Kladospohum gomba, Alternaha gomba, kutya, macska, csótány, D.Pterony atka, D.Farinae atka).

Az immunoglobulin E (IgE) szintjének normál határai

57. Allergiás provokatív vizsgálatok Ellenjavallatok.

in vivo biológiai tesztek, amelyek lehetővé teszik egy személy számára, hogy az adott allergénre azonnal azonosítsa az allergiát. Csak remisszióban végeztek.

Az allergén bevezetése a célszervben.

Megbízhatóbbak, mint a bőrvizsgálatok.

az anamnézis és a bőrvizsgálat eredményei közötti eltérések esetén

A provokatív tesztek ellenjavallt az LA súlyos tüneteinek előfordulása esetén: Stevensen-Johnson-szindróma, Lyell-szindróma, IEE, ASH.

58. Sorolja fel az in vitro diagnosztikai módszereket. Az in vitro diagnosztikai módszerek fő előnyei. A modern gyakorlatban alkalmazott módszerek az allergén-specifikus IgE meghatározására a szérumban. MACT (többszörös allergia teszt).

In vitro diagnosztikai módszerek

Az allergia diagnózisa a vérvizsgálatokra az allergológia modern trendje.

A bőrvizsgálatokkal és a provokatív tesztekkel ellentétben a vérvizsgálatok nem vezetnek allergiás reakciók kialakulásához egy betegben, gyakorlatilag nincsenek ellenjavallatok, és bármilyen allergia esetén ajánlott.

A főbb jelzések a következők:

korai gyermekkorban;

a betegek magas fokú szenzibilizációja;

a betegség folyamatos visszaesése a remisszió nélkül;

az antihisztamin és más gyógyszerek felszámolásának képtelensége;

többértékű szenzibilizáció, ha nincs lehetőség arra, hogy az összes feltételezett allergénnel egyidejűleg in vivo vizsgálatot végezzenek korlátozott vizsgálati időszakban;

drasztikusan megváltozott bőrreaktivitás;

hamis pozitív vagy hamis negatív eredmény a bőrvizsgálat során;

A specifikus in vitro diagnosztikai módszerek fő előnyei a következők:

a beteg biztonsága;

magas színvonalú és reprodukálhatóság;

kvantitatív (digitális) számviteli lehetőség;

a vizsgálat lefolytatásának lehetősége, ha a beteg nagy távolságban van az allergiától, és csak a beteg szérumát szállítják;

kis mennyiségű vér a kutatáshoz.

Az in vitro diagnosztikai módszerek a következők:

A teljes IgE meghatározása.

Az allergénspecifikus IgE meghatározása.

Az allergénspecifikus IgG meghatározása (teljes vagy csak G4 izotípus).

A hisztamin, szulfoleukotriének és más allergiás reakciók, citokinek és gyulladásos enzimek meghatározása.

Az immunkompetens sejtek aktiválásának transzmembrán fehérje markereinek expressziós szintjének értékelése áramlási citometriával.

Celluláris tesztek és reakciók (az immunválaszban részt vevő limfociták különböző alpopulációinak azonosítása és funkcionális aktivitásuk értékelése).

A modern gyakorlatban alkalmazott módszerek az allergén-specifikus IgE meghatározására a szérumban

Az allergénspecifikus IgE antitestek meghatározására különösen érzékeny és specifikus módszerek:

RAST (rádió allergiás teszt)

MAST (többszörös allergia teszt)

MACT (többszörös allergia teszt)

Az allergénspecifikus IgE meghatározására szolgáló módszer, a PACT-elvhez hasonlóan, ahol az allergént cellulózfonalokra szortálják, és a fotoreagenseket a reakció indikátoraként használják, amelynek lumineszcenciáját egy luminométeren rögzítik fotométeren

A módszer lehetővé teszi az eredmények gyors elérését

A kutatás lehetővé teszi a szükséges paraméterek meghatározását még egy betegben is, anélkül, hogy várná a minták felhalmozódását az egész készlet használatára.

59. Immunhiányos betegségek. Alapfogalmak. Elsődleges immunhiány, besorolás. Az immunopatológia az immunológiai terület, amely az immunrendszer immunopatogenezisét és betegségeit vizsgálja. Jelenleg számos immunrendszeri állapot és betegség létezik: immunhiány (primer és szekunder), autoimmun, allergiás betegségek, HIV-fertőzés, fertőző mononukleózis, limfoproliferatív betegségek stb. Immunhiány - immunológiai reaktivitás zavarai, amelyek az immunrendszer egy vagy több összetevőjének elvesztéséből erednek, vagy szorosan kölcsönhatásba lépnek a nem specifikus tényezőkkel. Az elsődleges immunhiány az öröklött rendellenességek heterogén csoportja, az immunitás egy vagy több összetevőjében hibás gének mutációja következtében. Ezek a betegségek a fertőzések fokozott érzékenységének, az autoimmun, allergiás és onkológiai betegségekre való hajlamnak. Besorolás: Kombinált T- és B-sejtes immunodef. - antitesthiány - jól viselt tünetekkel járó szindrómák - immunitás génje - a fagociták veleszületett rendellenességei - a veleszületett immunitás hibái - gyulladásos betegségek - komplement hiányosságok60. Az elsődleges immunhiány fő klinikai tünetei. A FID aggodalomra ad okot. A PID általános klinikai jellemzői - Immunhiányos megnyilvánulás korai életkorból. - ENT szervek és légzőszervek ismétlődő sérülése. - Ismétlődő pirogén fertőzések. - Opportunista fertőzések. - Ugyanazon ágens által okozott betegségek megismétlődése. - Autoimmun vagy krónikus betegségek. - Argiooteka.

9-10 riasztó jele a FID-nek kapcsolatban. - gyakori otitis (évente 6-8-szor) - sinusitis (évente 4-6-szor) - tüdőgyulladás (2-szer és gyakrabban évente) - bőr- és szervfolyamatok - antibiotikum-kezelés több mint 2 hónapig - legalább 2 fertőzés meningitis, osteomyelitis, sepsis. - a gyermek növekedése és fogyása. - 1 évesnél idősebb rákos vagy gombás bőrelváltozások. - a FID-ben szenvedő betegek jelenléte a családban, a gyermekek korai halálozása a fertőzésekből.

A PID T-sejtek általános ék-jellemzése: - A tünetek kialakulása csecsemőkorban - Ismétlődő fertőzések - Opportunisztikus fertőzések - Fertőzések vakcináció eredményeként. -A betegség "graft versus host" a malignitás kockázatának növekedése. A PID általános ék jellemzése sejtekben: - A tünetek megjelenése az anyai ellenanyagok eltűnése után a korai életkorban. - Ismétlődő fertőzések - Krónikus fertőzések - meningitis, septicemia, osteomyelitis. - a gombák és a vírusok ritka előfordulása. - az érett korú túlélés megfelelő kezeléssel - Nyirok hypoplasia - Lymphoid hyperplasia. - Megnövekedett allergiás és autoimmun betegségek.

61. Ismertesse az ataxia-telangiectasia szindrómát (Louis-Bar syn).

PID progresszív agyi neurodegenerációval. A betegség multiorganizmus, és a mozhechkovoy ataxia mellett a mentális retardáció és a bőr és a szem telangiektázia, ismételt bronchopulmonalis fertőzések, fokozott érzékenység a sugárzásra, a malignitás fokozott kockázata. Ék-megnyilvánulások: gyermekkorban, légúti fertőzésekre való hajlam, instabil járás, kínos mozdulatok, izom hipotenzió, érrendszeri telangiectasia. Gyermek póz: a fej és a vállak leeresztve, a könyökre hajlított karok. A gyerekek nem túl kényelmesek. A beszéd elmosódott, amimia. A bőr száraz, vékony, durva, hordható. És így tovább Immun-megnyilvánulások: T-limfopenia, csökkent IgA, Thymus hypoplasia, nyirokcsomók, lép. Kezelés: helyettesítő terápia immunoglobulinokkal, tímusz hormonokkal, antibiotikumokkal, gombaellenes szerekkel, immunotrop szerekkel. Prognózis: A betegek átlagosan 14-20 évig élnek. A halál fő oka a daganat. Többnyire limfoid. A súlyos fertőzések is lehetnek halálok.

62. Ismertesse a Nijmegen szindrómát.

A Nijmegen-szindróma a betegségek csoportjához kapcsolódik, amelyeknek a DNS-javulása károsodott. Meghatározott NBS1 génhibák. A betegek rendkívül érzékenyek, rosszindulatú, immunhiányos és növekedési zavarok. A betegek klinikailag kifejezett mikrocefhalia, az arccsontváz (madárszem) változása, a fertőzésekkel szembeni nagy érzékenység. A bőr foltja, mint a "kávé tejjel." Kezelés - immunglobulinok, vírusellenes és gombaellenes szerek.

Allergoszorbens többszörös teszt

A Hitachi Chemical Diagnostics, Inc. (HCD) volt az első olyan vállalat, amely kemilumineszcencia elemzéssel többszörös allergiás vizsgálati vizsgálatot (MAST) dolgozott ki a specifikus IgE szintjének meghatározására. Az Allergotest MAST kétségtelen előnyei vannak az in vitro allergiás diagnosztika más módszereivel szemben; kis mennyiségű szérum (0,75 ml), amely lehetővé teszi egyidejűleg akár 36 allergén meghatározását, a kemilumineszcens analízis technológia biztonságát és megbízhatóságát, a magas specificitást és az érzékenységet, a reprodukciós sebességet, a vizsgált allergének széles skáláját.

A HCD termékeket a világ több mint 40 országában sikeresen használják az orvosi intézményekben, így az orvosok hozzáférhetnek a legújabb technológiákhoz.

Oroszországban a HCD termékeket 1998 óta képviseli a Lumineri. A MAST-panelek diagnosztikai allergén összetételének létrehozásához vezető szakértők - az allergének és az immunológusok gondosan tanulmányozták mintegy 14 000 klinikai esetet, és csak az orosz körülményekre jellemző allergéneket választottak ki. Vezető szakértők az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériuma Gyermekgyógyászati ​​Kutatóintézetének, az Orosz Föderáció UDP központi tervezőirodájának, az RMAPO részvételével.

Az innovatív technológiák folyamatos bevezetése a MAST-allergia tesztek gyártásában, a HCD bemutatja az új OPTIGEN technológiát, amely a MAST-en alapul, amely az in vitro allergiás diagnosztika terén elért legújabb tudományos előrehaladást tükrözi.

Az OPTIGEN technológia fő összetevője egy kis műanyag tesztkamra, egy high-tech eszköz - az úgynevezett panel. Ez a panel három összetevőből áll: panel test, fedőüveg és válaszfal. A fedőüveg egyéni cellákból áll, amelyek belsőleges sorbens allergéneket tartalmaznak, és külső optikai lencsék a fényáram fokozására és fókuszálására.

Az OPTIGEN technológia fő összetevője egy kis műanyag tesztkamra, egy high-tech eszköz - az úgynevezett panel. Ez a panel három összetevőből áll: panel test, fedőüveg és válaszfal. A fedőüveg egyéni cellákból áll, amelyek belsőleges sorbens allergéneket tartalmaznak, és külső optikai lencsék a fényáram fokozására és fókuszálására.

A beteg vérmintájából nyert szérumot a panel tesztkamrájába szívjuk. A szérumallergén IgE-t specifikus allergénekkel társítják, amelyek a testrész belsejében bomlanak. Ezután a reagenseket hozzáadjuk a panelhez, amely változó intenzitású fényjelet generál arányban és az allergénspecifikus IgE mennyiségétől függően. A panelfényt CLA-1 luminométerrel mérik, az eredményeket automatikusan a beépített nyomtatóra nyomtatják.

A többszörös tesztelés előnyei: MAST OPTIGEN:

  • abszolút biztonság a beteg és az orvos számára;
  • a gyermekgyógyászatban való széles körű használat lehetősége;
  • a kemilumineszcens analízis technológiájának köszönhetően az eredmény legnagyobb pontossága és megbízhatósága;
  • hármas vezérlőrendszer (beleértve a műszer tesztelésére szolgáló vezérlőpanelt, 2 vezérlőszálat minden panelen a reagensek minőségének értékelésére, kontroll szérumok);
  • a specifikus IgE minimális koncentrációinak meghatározása (0,52 ng / ml vagy 0,22 LU / ml);
  • legfeljebb 180 allergén észlelése 5 betegnél 8 perc alatt;
  • elemzési eredmények fogadása a gyártás napján;
  • a minimális szérummennyiség - 300 μl;
  • egyszerűség, egyszerűség és megbízhatóság a kezelésben (a szerszámok hiánya, a kémcsövek);
  • teljes készlet OPTIGEN panelek minden szükséges reagenssel (puffer, oldószer konjugátum, fotoreakciós komponensek);
  • 1 év garancia az eszközre, az OPTIGEN panelek és reagensek hosszú távú tárolásának lehetősége;
  • az OPTIGEN panelek teljesen automatikus vizsgálata egy CLA-1 luminométerben, nyomtatási információk kényelmes formában;
  • teljes függetlenség a laboratóriumi alaptól. A CLA-1 készüléket a diagnosztikai laboratóriumba és a szakemberek irodájába is könnyen be lehet szerelni: allergológus, pulmonológus, gyermekorvos, szemész, bőrgyógyász, gasztroenterológus vagy bármely más érdekelt szakember;
  • az egyetlen vizsgálat elvégzésének képessége (egy panelt egy páciensre) a teszt költségének növelése nélkül;
  • magas rendszer-megbízhatóság és nincs szükség ismételt tesztekre;
  • az allergének kényelmes kombinációja az orosz OPTIGEN panelekben;
  • nincs szükség az eszköz komplex karbantartására, ami fontos a garancia utáni időszakra;
  • az eszköz számítógéphez való csatlakoztatásának képessége és az adatok archívumának létrehozása;

Az allergén panelek összetétele MAST OPTIGEN

OPTIGEN orosz l

  1. pitypang
  2. üröm
  3. quinoa
  4. Hazel (pollen)
  5. Fehér nyír
  6. Fekete éger
  7. Aspergillius
  8. Kladosporium
  9. Keverjük össze a csótánykeveréket I
  10. Ház por
  11. Timothy
  12. Meadow Fescue
  13. Hedgehog csapat
  14. Rozs (pollen)
  15. csirke
  16. Kukorica (élelmiszer)
  17. alma
  18. eper
  19. Búza (élelmiszer)
  20. burgonya
  21. sárgarépa
  22. tőkehal
  23. marhahús
  24. sertéshús
  25. paradicsom
  26. Egész tojás
  27. tej
  28. Mogyoró (élelmiszer)
  29. szójabab
  30. borsó
  31. Csirke toll
  32. Kutya (epid.)
  33. Ló (epid.)
  34. Macska (epid.)
  35. Mite farina
  36. Mite pteronissinus

OPTIGEN orosz IV

  1. pitypang
  2. üröm
  3. quinoa
  4. Fehér nyír
  5. Fekete éger
  6. Alternaria
  7. Candida
  8. Mucor
  9. Aspergillius
  10. Kladosporium
  11. Penicillium
  12. Keverjük össze a csótánykeveréket I
  13. Ház por
  14. Timothy
  15. Meadow Fescue
  16. Rozs (pollen)
  17. csirke
  18. zab
  19. alma
  20. eper
  21. Búza (élelmiszer)
  22. burgonya
  23. sárgarépa
  24. tőkehal
  25. marhahús
  26. sertéshús
  27. paradicsom
  28. Egész tojás
  29. tej
  30. Mogyoró (élelmiszer)
  31. szójabab
  32. Csirke toll
  33. Kutya (epid.)
  34. Macska (epid.)
  35. Mite farina
  36. Mite pteronissinus

OPTIGEN belégzés

  1. égerfa
  2. Hazel (pollen)
  3. Fehér nyír
  4. üröm
  5. Timothy
  6. Rozs (pollen)
  7. útifű
  8. Ash fa
  9. Penicillium
  10. Alternaria
  11. Cladosporium Aspergillus
  12. Hörcsög (epid.)
  13. Tengerimalac (epid.)
  14. Nyúl (epid.)
  15. Ló (epid.)
  16. Macska (epid.)
  17. Kutya (epid.)
  18. Jelölje be, farina
  19. Atka, pteronissinus

OPTIGEN étel

  1. rák
  2. tőkehal
  3. sárgarépa
  4. alma
  5. burgonya
  6. paradicsom
  7. zeller
  8. őszibarack
  9. dió
  10. földimogyoró
  11. mogyoró
  12. mandula
  13. szójabab
  14. rozs
  15. búza
  16. Szezámmag
  17. kazein
  18. tej
  19. Tojásfehér
  20. Tojássárgája

OPTIGEN Atopic

  1. Atka, pteronissinus
  2. Jelölje be, farina
  3. Aspergillius
  4. Kladosporium
  5. Ló (epid.)
  6. Kutya (epid.)
  7. Macska (epid.)
  8. Timothy
  9. üröm
  10. Fehér nyír
  11. Hazel (pollen)
  12. Tojásfehér
  13. tej
  14. tőkehal
  15. búza
  16. szójabab
  17. földimogyoró
  18. alma
  19. sárgarépa
  20. latex

PACT (rádió allergiás teszt)

Ezt a vizsgálatot a specifikus allergénekkel szembeni IgE antitestek, például a fűpor pollen vagy a háztartási poratkák szintjének mérésére használják. Egy kis vérmintát általában vénából veszünk. Ezután a vér vizsgálata a laboratóriumban. A mintába radioaktív címkét helyezünk, amely az IgE antitestekhez kötődik a vérben jelen lévő specifikus allergén ellen. Egy nagyon tiszta allergén kivonat van a papírlemez felületén. Egy vérmintát helyezünk a lemezre, és ha a vérben az allergén elleni IgE antitestek vannak, akkor a lemezen lévő allergénhez kötődnek. A következő lépésben radioaktív izotóppal jelölt speciális anti-IgE antitesteket adunk hozzá. Ha valamilyen mennyiségű IgE kötődik az allergénhez, akkor radioaktív antitestek kapcsolódnak ehhez a komplexhez. A kötött, jelzett anti-IgE szintjét sugárzásmérővel mérhetjük. Ez egy nagyon érzékeny módszer a legalacsonyabb IgE koncentrációk mérésére. Ezek alapján a beteg vérében az IgE antitestek szintjét értékeljük (10.1. Ábra).

A PACT nem rendelkezik semmilyen előnnyel az esetlegesen érzékenyebb bőrvizsgálatokkal szemben. Azonban a PACT-ot gyakran használják a bőrvizsgálatokkal együtt, ha az utóbbi eredményei nem meggyőzőek. Ezen túlmenően a PACT alkalmazható olyan esetekben, amikor a bőrvizsgálatokat nem lehet elvégezni, például súlyos ekcéma esetén. Ez a módszer különösen akkor hasznos, ha a bőrvizsgálatra adott anafilaxiás reakció fennáll, és ha a beteg antihisztaminokkal kezelik, amelyeket nem lehet törölni.

Bőrvizsgálatok - gyors, olcsó és megbízható módszer. A PACT biztonságos, de drága, laboratóriumi szakember munkáját igényli, ami azt jelenti, hogy az eredmény elérése több napot is igénybe vehet. A PACT nem alkalmas az élelmiszer-allergiák vizsgálatára. A negatív PACT eredmény nem zárja ki annak lehetőségét, hogy a beteg allergiás legyen az allergénre. Néha hamis negatív eredményt kap.

MAST (többszörös allergia teszt)

A MAST, valamint a PACT az IgE (anti-IgE) elleni antitestek kötődésén alapul a beteg IgE antitestjeivel. Ebben az esetben azonban az anti-IgE nem kapcsolódik egy radioaktív jelöléshez, hanem olyan enzimmel, amely képes reagálni bizonyos anyagokkal, lumineszcenciát okozva. Fényképezhető nagysebességű filmen. Egy teszt lehetővé teszi, hogy legfeljebb 35 különböző allergént azonosítson.

Hozzáadás dátuma: 2015-12-16 Megtekintések: 220 | Szerzői jog megsértése

DIAGNOSZTIKAI MÓDSZEREK VITRO-ban

A főbb jelzések a következők:

- korai gyermekkor;

- a betegek magas fokú szenzibilizációja;

- a betegség folyamatos visszaesése a remissziós időszakok nélkül;

- az antihisztaminok és más gyógyszerek felszámolásának képtelensége;

- többértékű szenzibilizáció, ha nincs lehetőség az in vivo vizsgálatok elvégzésére egyidejűleg az összes feltételezett allergénrel korlátozott vizsgálati időszakban;

- élesen megváltozott bőrreaktivitás;

- hamis pozitív vagy hamis negatív eredmény a bőrvizsgálatban;

A specifikus in vitro diagnosztikai módszerek fő előnyei a következők:

- a beteg biztonsága;

- magas színvonalú és reprodukálhatóság;

- a kvantitatív (digitális) elszámolás lehetősége;

- a kutatás lefolytatásának lehetősége abban az esetben, ha a beteg nagy távolságban van az allergiától, és csak a beteg szérumát szállítják;

- kis mennyiségű vér a kutatáshoz.

Az allergiás megbetegedések in vitro diagnosztizálására használt modern módszereket a 4. táblázat tartalmazza. 1.

Az allergiás betegségek in vitro diagnosztizálására használt modern módszerek

Módszerek a szérum teljes IgE meghatározására a vérszérumban

Az IgE koncentrációja az egészséges emberek szérumában a táblázatban található. 2.

Azonnali típusú allergiás reakciókban általában az IgE általános szintje emelkedik a vérszérumban, de bizonyos esetekben ez a mutató megfelelhet a normának. Ugyanakkor a magas IgE szinttel rendelkező csecsemőknél nagyobb az allergia kialakulásának kockázata. Az atópiás betegségek 95% -át érinti a magas IgE-szintű gyermekek. Az exogén asztmás és allergiás rhinitisben szenvedő felnőttek mintegy 70% -ánál az IgE szintje két standard eltéréssel meghaladja a normát. Különösen magas (több mint 1000 NE / ml) IgE szintet figyeltek meg a diffúz neurodermatitisben és a légzőrendszer atópiás betegségében.

Az IgE koncentrációja az egészséges emberek szérumában

A rendkívül érzékeny immunológiai vizsgálatok, amelyek kimutathatják az IgE alacsony koncentrációját (kevesebb, mint 50 NE / ml):

1. Immunvizsgálat (ELISA). A teljes IgE szintjének számszerűsítésére szilárd fázisú ELISA-t használunk (6. ábra), amelyben az IgE elleni antitesteket szilárd hordozóra sorolják, például egy polisztirol lemez lyukakba. A vizsgálati szérum beadása után képződött komplexet az enzimcímkével konjugált megfelelő antitestek (torma-peroxidáz, béta-galaktozidáz vagy lúgos foszfatáz) hozzáadásával detektáljuk.

Az ELISA meghatározásának elve az IgE meghatározására

Miután az antigént az enzimjelölt immunszérumhoz kapcsoltuk, a szubsztrát / kromogén hozzáadódik az elegyhez. A szubsztrátot az enzim hasítja, és a reakciótermék színe megváltozik; a színintenzitás közvetlenül arányos a kötött antigénmolekulák és a jelölt antitestek számával. A pozitív eredmény megváltoztatja a kromogén színét. A következő komponens hozzáadása után a nem kötött reagenseket mosással eltávolítjuk a lyukakból. A kísérleti és a kontrollminták reakcióinak intenzitását egy lemez spektrofotométeren (ELISA-olvasó) végezzük, a meghatározott hullámhosszú fényelnyeléssel (a TMB kromogén (tetrametil-benzidin) esetében) 450 nm).

2. Kemilumineszcens ("szendvics") elemzés paramágneses címkével.

Egy lumineszcens jelzéssel (akridin-észter) jelzett anti-IgE-AT-t adunk a beteg szérumához. A nem kötött antitestek mosása után a paramágneses részecskékhez kovalensen kötődő anti-IgE antitesteket adunk hozzá. Figyelembe véve egy speciális mérőberendezésre van szükség, amely magában foglal egy fotométert és egy mágneses elektródát. A mágnes rögzíti az IgE-konjugátumokhoz kapcsolódó paramágneses részecskéket, az elektrokémiai reakció eredményeképpen a címke lumineszcenciája fotometriásan mérhető. Ilyen eszközök például az ACS: 180 (Ciba Corning Diagnostics Corp.), NPD (Calgon Vestal Laboratories), Clorox (Clorox Company). A módszer nagyon érzékeny, és lehetővé teszi a teljes IgE koncentrációjának meghatározását 1,5-3000 kE / l tartományban.

3. A radioimmun analízis (RIA) az immunológiai reakció egyik komponensének (antigén vagy antitest) az I125 radioaktív izotóppal való jelölésén alapuló módszer. A teljes IgE kvantitatív meghatározásához közvetett vagy kompetitív szilárd fázisú RIA-t alkalmazunk (a szilárd fázisban immobilizáljuk a humán IgE elleni antitesteket). Ez utóbbi esetben a beteg szérumát és egy bizonyos mennyiségű I125-et jelölt IgE-t egyidejűleg adunk a rendszerhez. A reakció eredményeként ennek a komponensnek a kötődése fordítottan arányos az IgE tartalmával a beteg szérumában. Az eredményeket gamma számlálóval értékeljük a kapott immunkomplexek radioaktivitására.

Mivel a RIA költséges berendezéseket és reagenseket igényel, valamint a radioaktív izotópokkal való munkavégzés feltételeit, jelenleg nem széles körben használják.

A modern gyakorlatban alkalmazott módszerek az allergén-specifikus IgE meghatározására a szérumban

Az allergénspecifikus IgE antitestek meghatározására különösen érzékeny és specifikus módszerek a PAST, MAST, immunoblott, szilárd fázisú ELISA, microarray.

A RAST (rádió allergiás teszt) egy olyan módszer, amellyel a beteg szérumában specifikus IgE antitesteket lehet meghatározni egy korábban porózus hordozóra felvett allergénhez (7. ábra).

Oldhatatlan polimert vezetünk be a páciens szérumába - olyan allergén konjugátumba, amely elnyeli az alkalmazott allergénre specifikus antitesteket. Ezután adjunk hozzá antiglobulin szérumot (anti-IgE), amelyet radioaktív izotóppal jelöltünk. A nem kötött reagensek mosása után a kapott eredményeket gamma számlálókkal értékeltük az eredményül kapott immunkomplexek radioaktivitásának szintjén a kontrollhoz és a standard görbéhez képest.

A specifikus IgE meghatározása a PACT segítségével kimutatható az anafilaxiás reakciók, a bőrelváltozások és a kezelés nagy kockázata, ami befolyásolja a bőrvizsgálatok eredményeit.

Jelenleg a harmadik generációs RAST-t széles körben használják, melyeket nagy érzékenység és specifitás, automatizálás, fluorokróm, enzimcímkék vagy kemilumineszcencia jellemez.

A RAST beállításának elve (L. Wide)

Az allergénspecifikus IgE meghatározása PACT-ben fluoreszcens jelöléssel

A cellulóz hordozóra szedő allergénhez adjuk hozzá a beteg szérumát. Ezután hozzáadjuk az enzimmel jelölt (a-Galaktosidáz) anti-IgE-AT-t, amely a kapott konjugátumhoz kötődik. A nem kötött antitestek kiöblítése után egy szubsztrátot (4-metil -imbelliferil-β-D-galaktozid) adunk hozzá, amelynek fermentációja során fluoreszcens anyag képződik, amelynek koncentrációját egy leolvasóval (FluoroCount) detektáljuk.

A kemilumineszcencia hatásán alapuló módszer egy példája a MAST.

A MACT (Multiple Allergy Testing Test) egy olyan módszer, amely meghatározza az allergénspecifikus IgE-t, hasonlóan a PACT-elvhez, ahol az allergént cellulózfonalokra sorolják, és a fotoreaktorokat, amelyek lumineszcenciáját egy Polaroid fólián rögzítik, a reakció indikátoraként, fotométeren használják (8. ábra).. A módszer lehetővé teszi, hogy gyorsan megkapja a vizsgálat eredményeit, lehetővé teszi a szükséges paraméterek meghatározását még egy betegben is, anélkül, hogy várná a minták felhalmozódását az egész készlet használatára.

Készülék a MAST beállításához

1 - MAST panel szerelvény; 2 - fedél; 3 - cellulózfonal adszorbeált allergénnel; 4 - test

A Pseudoimmunoblot egy olyan módszer, amely lehetővé teszi, hogy a szérumban vagy más anyagban egyidejűleg kimutassák az allergének (mindegyikük) spektrumára specifikus specifikus IgE antitesteket. A pszeudoimmunoblot szilárd fázisú ELISA-n alapul, de az utóbbitól eltérően nagyobb specificitással (de kevésbé érzékenységgel), végrehajtási sebességgel, minimális vérmennyiséggel (kevesebb, mint 0,5 ml) és nagyszámú allergénnel történő egyidejű vizsgálat lehetőségével (kb. 20 minden panelen). Ezenkívül jelenleg az eredmények nagy pontosságú feldolgozására szolgáló programot alkalmaznak.

A modern vizsgálati rendszerek az allergén állapot kétszintű meghatározásának elvére épülnek: az első szinten standard allergiás vizsgálatot végeznek, amely lehetővé teszi az allergének azon csoportjának meghatározását, amelyekre érzékenység van. Ezután lehetőség van kiterjesztett (pontosabb és komplexebb) érzékenység meghatározására egy adott allergénre.

A klasszikus immunoblotot egy kórokozó allergén (anamnézis, eliminációs teszt stb. Adatai) és a specifikus IgE negatív vizsgálati eredményei esetén használják az allergén jellemzett összetevőivel. Ilyen esetekben a blotokat durva allergén kivonatból nyerjük, és a beteg szérumát az allergén kis (nem jellemzett) komponenseire specifikus IgE jelenlétére elemezzük.

A Microarrey (microarrey) viszonylag új (kifejlesztett az 1990-es években) és nagyon ígéretes irányt mutat az alkalmazott molekuláris biológiában. Jelenleg a DNS oligonukleotidokon alapuló microerray technológia a legnagyobb figyelmet szerezte, de a mikroerray is fejlődik monoklonális antitestek és rekombináns antigének alkalmazásával. Ez a technológia különösen az allergiák kezelésének diagnosztizálására és optimalizálására szolgál (9. ábra).

Az allergia diagnosztizálására szolgáló microerray rendszer

A tanulmány több szakaszban zajlik:

1. Mikrochip előkészítés: a rekombináns allergéneket egy aktivált üveglemez felületén feltárják (a csepp térfogata nanolitrátor, az antigén mennyisége tucatnyi pikogram). Egy üveg 12 sejtet tartalmaz. Minden sejt több tucat (több száz) különböző allergénből és egy kalibrációs görbéből áll (növekvő mennyiségű IgE) triplettben.

Így egyidejűleg legfeljebb 12 beteget lehet vizsgálni.

a) a beteg szérumok ásása (15 μl);

b) inkubálás (a beteg IgE kötődik az allergénekhez);

c) fluorokróm-jelzett anti-IgE monoklonális antitestek hozzáadása;

d) a mikrochip szkennelése;

e) tipikus mikrochip scanogram:

- az első három sor = kalibrációs görbe (a ragyogás intenzitása arányos a rögzített IgE számával);

- továbbá - a páciens szenzibilizációs profilja (az IgE specifitása és mennyisége a beteg szérumában).

Az allergénekkel (CAST) végzett sejtaktiválás tesztjei modern módszerek a GST mediátor típusának diagnosztizálására, nem pedig az IgE által okozott (10. ábra).

CAST / FAST lépcsőzetes elv

1 - bazofil stimuláció (IgE-függő, allergén használata, anti-FceRI antitestek használata; IgE-független, élelmiszer-adalékanyagok, nem szteroid gyulladáscsökkentő gyógyszerek (aszpirin), gyógyszerek); 2 - a basophilok azonosítása. Kizárólag FAST-hez vezetett, általában jelzett antitestek segítségével a CCR3 IgE vagy kemokin receptorok ellen; 3 - a reakció figyelembevétele. A CAST-t a leukotriének (TIFA) mennyiségi meghatározásánál veszik figyelembe. FAST - az aktivált bazofilok százalékos arányának meghatározása (CD63-at expresszáló citofluorimetriával)

Korábban hasonló reaktivitást mutattak ki a leukocita károsodás tesztjeiben és a bazofilek által a hisztamin felszabadulás stimulálásában, de túlságosan munkaigényesek, rosszul reprodukáltak és nem alkalmasak a szabványosításra. A СAST / FAST-t több szakaszban helyezzük el:

1. A vérleukociták izolálása:

a) adjunk hozzá dextránt a stabilizált vérhez az eritrociták kicsapásához;

b) a felülúszót leukociták kicsapására (dextrán és vérlemezkék eltávolítása) centrifugáljuk;

c) a leukocita pelletet az IL3-t tartalmazó pufferoldatban szuszpendáljuk.

2. A leukociták stimulálása:

a) anti-FceRI antitestekkel (pozitív kontroll);

b) sóoldat (negatív kontroll);

c) különböző koncentrációkban lévő allergén.

3. Kiválasztjuk a felülúszókat, és a leukotrién tartalmat azonnal meghatározzuk szilárd fázisú ELISA-val. A mennyiségi meghatározáshoz a kalibrációs görbe kialakításához számos szabványos hígítást kell alkalmazni.

4. A vizsgálat értelmezése. Élelmiszerallergének esetében az alsó (küszöbérték) szint (levágva) általában 400 pg / ml; élelmiszer-adalékanyagok, kábítószer-allergének, levegőallergének - körülbelül 40 pg / ml.

A FAST különbözik a CAST-től az aktivált bazofilek számlálásának módjában: a CD63-at és a kapcsolódó IgE-t expresszáló sejtek százalékos arányának kimutatása és számlálása (11. ábra). A számunkra érdekes sejteknek IgE-t kell kötniük a felszínen, azaz kötődniük kell az FITC-vel jelölt anti-IgE antitestekhez, és erősen ragyogniuk. Emellett aktivált hízósejtek expresszálják a CD63-at, kötődnek a PE-vel jelölt anti-CD63 antitestekhez, és ragyognak pirossal. Így a teszt pozitív, ha a második negyedben a sejtek jelentős (> 5–15%) százalékát (a grafikonon lévő pontokat) találjuk. Jelenleg kereskedelmi készletek állnak rendelkezésre kombinált tesztek (CAST és FAST) összeállítására egy kémcsőben.

Meg kell jegyezni, hogy a CAST / FAST leukotrién szekréciót mutat leukocitákkal mind az allergén-specifikus IgE jelenlétében, mind azok nélkül. A CAST / FAST alkalmazásának főbb indikációi: a GNT gyanúja mediátor típus szerint és specifikus IgE hiánya; az élelmiszer-adalékanyagokkal és a gyógyszerallergénekkel szembeni túlérzékenység; aszpirin-asztma és hasonló állapotok diagnosztizálása. A CAST / FAST nem ajánlott primer allergológiai vizsgálatoknak (ezek nehezebbek, drágábbak, és alacsonyabbak, mint a specifikus IgE (UniCAP, stb.) Kimutatására szolgáló standard tesztek).

a - negatív kontroll; b - pozitív kontroll. Megnevezések: PE - phycoerythrin (piros fény); FITC - fluoreszcein (zöld ragyogás); Q1-4 - kvadránsok a sejteloszlási gráfon (Q1 - erős piros ragyogás, gyenge zöld; Q2 - erős piros és erős zöld; Q3 - gyenge piros és gyenge zöld; Q4 - gyenge piros és erős zöld ragyogás)

Az allergiás citokinek és az immungyulladás mediátorainak tanulmányozására szolgáló módszerek.

Mediátorok és citokinek meghatározása a szisztémás keringésben (általában szilárd fázisú ELISA módszerrel): t

1. A hisztamin kimutatása nehéz az inaktiváció rendkívül magas aránya miatt (perc), ezért a vizeletben lévő metil-hisztamin kimutatása gyakrabban történik a szisztémás keringésben (anafilaxiás sokk) jelenlétének kimutatására (a szisztémás anafilaxia megnyilvánulása eltűnése után több órán át magas).

2. A triptáz meghatározása a szérumban. A triptáz a hízósejt granulátumban található, és hosszú ideig (több órán át) a keringésben marad.

3. A perifériás vér citokin állapotának meghatározása (IL4, IFNy, IFNy / IL4) rendkívül általános képet ad az immunrendszer válaszreakciójának típusáról a vizsgálat időpontjában. A 80-as években népszerű volt. században. Később - a 90-es években. a Th1 / Th2 modell lehetővé tette a T-szabályozók allergiában játszott szerepének tanulmányozását.

4. Bizonyos citokineket szekretáló sejtek tartalmának meghatározása. Jelenleg az allergén-specifikus sejtek (tetramer-technológia) paramétereit lehet meghatározni. Ezeket a célokat gyakran használják áramlási citofluorimetria és alispot.

A citokinek és a mediátorok meghatározása a szövetekben (lehetővé teszi a gyulladás természetét, annak intenzitását, az uralkodó patogenezist):

1. A NO meghatározása a kilégzett levegőben: egy egyszerű, nem invazív teszt, amely lehetővé teszi a légutakban a gyulladásos folyamat intenzitásának nyomon követését (a hörgő-asztma kezelésének ellenőrzése).

2. A mediátorok és citokinek meghatározása mosásokban, exudátumokban és más leválasztható sérült szövetekben.

3. A citokineket és a mediátorokat szintetizáló sejtek azonosítása a sérült szövetek biopsziás szakaszaiban.

4. A citokinek és mediátorok mRNS mennyiségi meghatározása mosásokban, kaparásokban és biopsziás anyagokban.

Meg kell jegyezni, hogy az allergiás folyamatokban a citokinek meghatározására szolgáló módszereket elsősorban tudományos célokra használják.

Történelmi jelentőségű vizsgálatok

Shelley / Schwartz teszt - bazofil / hízósejt degranuláció egy adott allergén jelenlétében. A tesztet széles körben alkalmazták az I. típusú GNT típusú allergiás betegségek laboratóriumi diagnózisában.

Közvetett basofil teszt (Shelley teszt). Ez a vizsgálat a bazofilok morfológiai változásainak vizsgálatán alapul, mely a páciens szérumának és egy specifikus allergén kölcsönhatásának köszönhető. A neutrális vörös festék szelektíven foltok a bazofil granulátumokat tégla-vörös színben, ami lehetővé teszi, hogy megkülönböztessék őket a többi sejttől. A reakciót mikroszkóp alatt merítjük egy merülő rendszerrel. A változatlan bazofilek lekerekítettek; a festékkel festett szemcsék a sejt belsejében találhatók. A pozitív reakció a sejtek alakváltozásában, a pszeudopodia kialakulásában, a granulátum fokozott mozgásában és ritkán a granulátum felszabadulásában a sejtből történő felszabadulásával nyilvánul meg. Mindegyik készítménynek 40 bazofilje van, a morfológiailag megváltozott sejtek arányát mind a kísérletben, mind a kontrollban számítjuk.

Feltételesen 3 fokos reakció: gyenge (a megváltozott basophilok aránya a kísérletben meghaladja a kontroll 10% -át), mérsékelt (15% -kal), élesen pozitív (20% vagy annál nagyobb). Ez minden esetben a legmagasabb nemspecifikus bazofil választ tartalmazó kontroll eredményekre utal.

Közvetlen bazofil teszt (Shelley teszt). Ez a vizsgálat az allergiás betegségben szenvedő beteg perifériás vérének bazofiljeiben morfológiai változások vizsgálatán alapul, amikor egy adott allergénnel kölcsönhatásba lép. A reakció értékelését a közvetett bazofil vizsgálathoz hasonlóan végezzük.

A granulocita károsodás (RPG), a neutrofil károsodási index (PPN) reakciója, a kálium felszabadulásának reakciója a leukocitáktól, enzimektől stb. Ennek a megközelítésnek számos módszere van. Például az izolált leukocitákat egy ideig allergén oldattal inkubáljuk, majd a neutrofilek károsodását rögzítik:

- morfológiailag: a morfológia megváltoztatásával, tripán kék, etidium-bromid stb. festésével (sérült / elhalt sejtek foltosak);

- fotometrikusan: a kálium-ionok koncentrációjának növekedését láng-fotométerrel határozzuk meg, a mieloperoxidáz felszabadulását a szubsztrát-kromogén fermentációja és az oldat színének változása határozza meg egy lemez fotométeren.

A hisztamin felszabadulásának reakciója a humán perifériás vér-bazofilekből a hisztamin felszabadulásának figyelembevételével történik, miután a basophil sejteket specifikus allergénekkel kezelték. A sejtekből származó hisztamin felszabadulás stimulátorai allergének, anti-IgE, C5a. Számos citokin - IL-3, IL-5, CSF-GM - növeli a hisztamin felszabadulását a bazofilekkel. A vizsgálatot a szervezet in vitro urticariával, atópiás dermatitissel és kísérleti vizsgálatokkal szembeni érzékenységének meghatározására használtuk.

A használathoz és / vagy értelmezéshez nem ajánlott vizsgálatok:

1. Az IgG meghatározása, beleértve az IgG4-et is (kivéve ha ez szükséges).

2. Kineziológia (metry) - egy allergénnel érintkező (relatív) izomerősség egyidejű mérése. Ha okozhat allergiát, az erősség csökken. Ha egy specifikus ellenszert észlel, az helyreáll.

3. VEGA (elektrotermometria, Voll teszt) - a bőr (szövetek) ellenállásának mérése az akupunktúrás pontok között egyidejű érintkezés közben (demonstráció) egy allergénnel. Vannak kereskedelmi eszközök és tesztrendszerek.

4. Auriculocardialis reflex - a vérfeltöltési paraméterek / pulzus stb. Mérése az allergénnel való érintkezés pillanatában.

5. Próba provokáció-semlegesítés: a bőr vagy más minták előállítása az allergén koncentrációjának fokozatos növekedésével, a kifejezett reakció elérése érdekében. Így megtalálható a feloldó koncentráció. Ezután helyezze a mintát, fokozatosan csökkentve az allergén koncentrációját, amíg a reakció eltűnik. Ez a koncentráció specifikus deszenzitizációra alkalmazható.

6. A vérreakció elemzése: egy csepp vér keveredik az allergén / élelmiszer oldatokkal, stb. Egy idő után a kísérleti cseppek változásait mikroszkóposan hasonlítjuk össze a kontrollal.

7. Iridológiai allergia.

8. Az emberi test vagy szellem különböző misztikus formáinak energiaellátásának károsodott áramlásának diagnosztizálása.